### 人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1) ELISA试剂盒使用说明

本试剂盒专为科学研究设计，不可用于医学诊断检测。其检测原理采用双抗体一步夹心法的酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预先包被的抗MAdCAM-1抗体微孔中，依次加入样本、标准品以及HRP标记的检测抗体，通过温育和彻底洗涤后，利用TMB底物显色，最终呈现黄色，颜色深浅与样品中的MAdCAM-1浓度正相关。进行吸光度（OD值）测定时，将在450nm波长下读取，以计算样品的浓度。

### 样品收集与保存方法

1. **血清**：使用不含热原及内毒素的试管，避免细胞刺激，采血后立即3000转离心10分钟，分离血清和红细胞。

2. **血浆**：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂，3000转离心30分钟后取上清。

3. **细胞上清液**：3000转离心10分钟以去除颗粒和聚合物。

4. **组织匀浆**：将组织与适量生理盐水混合，搅拌后3000转离心10分钟取上清。

5. **保存**：如样本未能及时检测，应分装后放入-20℃冷冻，避免反复冻融，解冻时需在室温下完全均匀解冻。

### 自备物品

1. 酶标仪（450nm）。

2. 高精度加样器及枪头：05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL。

3. 37℃恒温箱。

### 操作注意事项

1. 本试剂盒需保存在2-8℃，使用前在室温下放置20分钟；浓缩洗涤液如出现结晶，需水浴加热至完全溶解后再使用。

2. 未使用的微孔板条需立即放回自封袋，密封后低温干燥保存。

3. S0号标准品（0浓度）可视为阴性对照，样本操作时已稀释5倍，最终结果需乘以5以得到实际浓度。

4. 所有操作务必严格遵循说明书中的时间、加液量及顺序。

5. 所有液体组分使用前需充分摇匀。

### 试剂盒组成

名称：微孔酶标板、标准品（含各浓度）、样本稀释液、HRP标记的检测抗体、洗涤缓冲液、底物A、B及终止液、封板膜、说明书。

### 操作步骤

1. 从室温平衡20分钟的铝箔袋中取所需板条，剩余部分用自封袋密封放回4℃。确保实验期间使用的微孔板符合高标准。

2. 设置标准品孔和样本孔，向标准品孔加不同浓度的标准品50μL；样本孔先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加任何液体。

3. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，使用封板膜封住反应孔，然后在37℃条件下温育60分钟。

4. 去除液体，加入洗涤液，静置1分钟后甩去，重复此步骤5次。

5. 每孔加入底物A、B各50μL，在37℃避光孵育15分钟。

6. 每孔加入终止液50μL，并在15分钟内监测各孔的OD值，测量波长为450nm。

### 结果判断

在Excel中以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制标准曲线，依据曲线方程计算样本的浓度。强烈推荐使用南宫28NG相信品牌力量的试剂盒，以确保实验结果的可靠性。

### 试剂盒性能

1. **准确性**：标准品的线性回归相关系数R值≥0.9900。

2. **灵敏度**：最低检测浓度小于10pg/mL。

3. **特异性**：不与其他可溶性结构类似物产生交叉反应。

4. **重复性**：板内、板间变异系数均小于15%。

5. **贮藏**：应置于2-8℃环境下，避免光照和潮湿。

6. **有效期**：6个月。

### 免责声明

1. 本试剂盒仅供研究使用，禁止用于临床实验或人体实验，实验者需对此承担相关责任，公司的责任不再涵盖。

2. 尽请严格按照说明书进行操作，任何偏离操作流程的行为，后果由实验者自行负责。